StarBright UltraViolet 蛍光色素

SBUV400 蛍光色素は，StarBright 蛍光色素のすべての利点を備えた355 nmの明るいレーザーで励起される蛍光色素で，従来のフローサイトメトリーおよび フルスペクトルフローサイトメトリーでの使用に適しています（Fig. 3）．

Fig. 2. SBUV400．A, 従来のスペクトル．Ultravioletレーザー（点線）による励起と，蛍光ヒストグラム．B, 正規化された蛍光シグネチャー．全波長における蛍光を示す全蛍光スペクトル．SpectroFlo ソフトウェアを使用し，5L Cytek Aurora フローサイトメトリーシステムでデータを収集した．

Fig. 3. 明るさの比較．ヒト末梢血をCD4SBUV4000 (MCA1267SBUV400) またはCD4BUV395で染色した．SBUV400は競合色素より2倍明るい．BUVはBrilliant Ultraviolet，SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstaining index.

SBUV400は，他のチャンネルへの励起および蛍光を最小限に抑え，特別なバッファーを必要としないため，既存のパネルに簡単に追加してパネルサイズを大きくしたり，他のチャンネルにスピルオーバーする蛍光色素を置き換えたりすることができます．StarBrightを含む他の蛍光色素によるSBUV400の染色例をFigure 4に示す．

Fig. 4. SBUV蛍光色素の性能．ヒト末梢血を様々なSBUV400標識抗体で染色し，異なるStarBright VioletまたはPE標識抗体でカウンター染色した．染色は1% BSAを含むPBS中で行った．

SBUV445 は，最も近い競合色素の最大 20 倍の明るさを示し(Fig. 6)，抗原密度が高い場合で励起スペクトルと蛍光スペクトルが類似している競合色素を使用して分離が困難なときになどで、陽性集団と陰性集団を明確に分離することができます．

Fig. 5. SBUV445. A, 従来のスペクトル．Ultravioletによる励起(点線)と蛍光ヒストグラム(影付き)．B, 正規化色素シグネチャー．全波長における全蛍光スペクトル．データは，SpectroFlo ソフトウェアを使用し，5L Cytek Aurora フローサイトメトリーシステムで収集した．  

Fig. 6. 明るさの比較. ヒト末梢血をCD4SBUV445 (MCA1267SBUV445) またはCD4 DyLight 350で染色した．SBUV445は競合色素の20倍以上明るい．SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstain index．

SBUV445は，CD25のような活性化時にアップレギュレートされるマーカーなどのマウス末梢血NK細胞のようなレアポピュレーションやCD27のような一般的な免疫表現型マーカーを検出するのに十分な明るさを有する（Fig. 7）．染色時に特別なバッファーを必要とせず，固定も可能で，ロット間の再現性も高い．SBUV445は，既存のパネルに簡単に追加でき，より高分解能を得るために，暗い蛍光色素と置き換えることができる．355 nm UVレーザーからこの波長での蛍光を発する適切な色素は他にないため，この色素を使用することで，すべてのレーザーとフィルターでマーカーを分離し，ベストプラクティスに従うことができます．さらに，スペクトルフローサイトメトリーでは，競合する蛍光色素が存在しないため，SBUV445は類似性スコアが低く，全体的な複雑さを増すことなくパネルサイズを大きくすることができます．.

Fig. 7. SBUV445の性能. ヒト末梢血を種々のSBUV445標識抗体で染色し，種々のStarBright Violet蛍光色素，StarBright Blue蛍光色素，またはFITC標識抗体でカウンター染色した．染色はFcブロックを加えた1％BSA含有PBS中で行った．.

SBUV510 は，StarBright Dyes のすべての利点を備えた 355 nm の明るいレーザー励起色素で，従来のフローサイトメトリーおよび フルスペクトルフローサイトメトリー の両方での使用に適しています（Figure. 9）．

Fig. 8. SBUV510．A, 従来のスペクトル．Ultraviolet（点線）による励起と，蛍光ヒストグラム．B:正規化された色素シグネチャー．全波長での発光を示す全蛍光スペクトル．データは，SpectroFlo ソフトウェアを使用し，5L Cytek Aurora フローサイトメトリーシステムで収集した． 

Fig. 9. 明るさの比較．ヒト末梢血をCD4SBUV510 (MCA1267SBUV510) またはCD4 BUV496で染色した．SBUV510は競合色素より2倍明るい．BUVはBrilliant Ultraviolet，SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstain indexを示す．

SBUV510は最も近い競合色素（Fig. 9）より2倍明るく，従来のタンデム色素でもありません．一般に，タンデム蛍光色素では，ドナー色素におけるチャンネルでのシグナルが減少する．固定も可能で，特別なバッファーを必要とせず，タンデム色素と比較してもロット間の再現性が高いため，SBUV510は既存のパネルに簡単に追加でき，より高分解能を得るために暗い色素と置き換えることができます．

SBUV575 は，StarBright Dyes のすべての利点を備えた 355 nm の高輝度レーザー励起色素で，従来のフローサイトメトリーおよび フルスペクトルフローサイトメトリー の両方での使用に適しています（Fig. 11A）．最も近い競合色素の2倍の明るさであるため，特別なバッファーを使用せずに，T細胞表面に多く存在しないCD4，CD8およびCD28のような抗原を検出するために使用できます(Fig. 11B)．

Fig. 10. SBUV575．A, 従来のスペクトル．Ultraviolet（点線）による励起と，蛍光ヒストグラム．B:正規化色素シグネチャー． 全波長での発光を示す全蛍光スペクトル．データは，SpectroFloソフトウェアを用いて5L Cytek Auroraフローサイトメトリーシステムで収集した．

Fig. 11. 低密度マーカー用の明るい色素．A,  ヒト末梢血をCD4SBUV575 (MCA1267SBUV575) またはCD4BUV563で染色した．SBUV575は競合色素より2倍明るい．BUVはBrilliant Ultraviolet，SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstaining index．B, ヒト末梢血を CD4SBUV510 (MCA1267SBUV510), CD8SBV710 (MCA1226SBV710), CD27SBV670 (MCA755SBV670), CD28SBUV575 (MCA709SBUV575).で染色した．

SBUV605 は，StarBright Dyes のすべての利点を備えた 355 nm の高輝度レーザー励起色素で，従来のフローサイトメトリーおよび フルスペクトルフローサイトメトリーの両方での使用に適しています（Fig. 13）．最も近い競合色素よりも明るく，スペクトル特性も改善されているため，マルチカラーパネルにおける既存色素の代替に適しています．

Fig. 12. SBUV605 A，従来のスペクトル．Ultraviolet（点線）レーザーによる励起と，蛍光ヒストグラム(影付き)．B, 正規化色素シグネチャー. 全波長での発光を示す全蛍光スペクトル．データは5L Cytek AuroraフローサイトメトリーシステムでSpectroFloソフトウェアを用いて収集した．

Fig . 13. SBUV605の性能． A, ヒト末梢血をCD4SBUV605 (MCA1267SBUV605) またはCD4 BUV615で染色した．SBUV605は競合色素よりも明るい．BUVはBrilliant Ultraviolet，SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstain index. B, ヒト末梢血をCD3SBUV400 (MCA463SBUV400) と CD19SBUV605 (MCA1940SBUV605)で染色した．

SBUV665は，StarBright Dyes のすべての利点を備えた 355 nm の明るいレーザー励起色素で，特別なバッファーを必要とせず，従来のフローサイトメトリーおよび フルスペクトルフローサイトメトリー での使用に適しています（Fig. 15）．

Fig. 14. SBUV665．A, 従来のスペクトル．Ultravioletレーザー（点線）による励起と蛍光ヒストグラム(影付き)．B:正規化色素シグネチャー．全波長での蛍光を示す全蛍光スペクトル．データは，SpectroFlo ソフトウェアを使用し，5-L Cytek Aurora フローサイトメトリーシステムで収集した．

Fig. 15. 明るさの比較．ヒト末梢血を . CD4SBUV665 (MCA1267SBUV665) またはCD4BUV661で染色した．SBUV665は競合色素より2倍明るい．BUVはBrilliant Ultraviolet，SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstaining indexを示す．

SBUV665はBUV661と比較して，Alexa Fluor 647やAlexa Fluor 700へのスピルオーバーが減少していますが，それでも弱いポジティブポピュレーションの分離が問題になる場合があります．パネル構築のベストプラクティスに従い，問題を引き起こす可能性のある色素を用いたマーカーの組み合わせは避けるべきです．これは発現範囲の広いCD127（Figure. 16）とCD4で実証されている．CD127loのCD4hi細胞はCD127negCD4hiと区別できない．CD3negCD4hiクラスターを持たないCD3のようなマーカーを用いると，Alexa Fluor 700と組み合わせても集団を容易に区別できる．スピルオーバーとスプレッディングの値を以下に示す（Table 2）．

Fig. 16. スピルオーバーの考察. CD4SBUV665 (MCA1267SBUV665), CD127A647 (HCA145A647), CD3A700 (MCA463A700). について染色した．スピルオーバーとスプレッディングはそれぞれの表に示されている．

Table 2. SBUV665のスピルオーバーとスプレッディングの値．5.

Spillover:

Spreading:

SBUV700は，StarBrightのすべての利点を備えた，明るく355 nmレーザーで励起可能な新しい蛍光色素であり，フルスペクトルフローサイトメトリーに最適です．

Fig. 19. SBUV700. A, 従来型スペクトル． Ultravioletレーザー（点線）による励起で，蛍光は陰影付きヒストグラムに示される．B, 蛍光色素の正規化スペクトル．すべての波長での蛍光を示す完全な蛍光スペクトル．データは，SpectroFloソフトウェアを使用し，5-L Cytek Auroraフローサイトメトリーシステムで収集された．

Fig. 20. 染色輝度。 ヒト末梢血をCD4SBUV700（MCA1267SBUV700）で染色し、染色指数を取得して輝度を計算し、他の染色色素との比較を可能にした。SBUV：StarBright UltraViolet、SI：染色指数。

355 nmレーザーで励起されるSBUV700は，類似の蛍光波長を持つ比較対象品のないユニークな蛍光色素です．5-L Aurora（Cytek Biosciences）を使用して設計されたこの蛍光色素は，UV13チャネルで独自のピーク蛍光を示し，SBUV665とSBUV740との類似度スコアはそれぞれ0.65と0.64であり，スプレッディングも低い．405 nmレーザーによる二次励起ピークがあるにもかかわらず，SBUV700とSBV710の間にはほとんどスプレッディングがみられない（Figure 19参照）．SBUV700は当社のSpectral StarBright 蛍光色素シリーズの一員です．

Fig. 21. SBUV700のスプレッディング. ヒト末梢血をCD4SBUV700（MCA1267SBUV700）で染色し，SBUV665，SBUV740，およびSBV710への拡散を測定した．データはCytek Auroraで生成された．

SBUV740 は，StarBright蛍光色素のすべての利点を備えた 355 nm の高輝度レーザー励起色素で，従来のフローサイトメトリーおよびフルスペクトルフローサイトメトリー. の両方での使用に適しています．SBUV740は従来のタンデム色素とは異なり，従来のタンデム色素の2倍の明るさを有します（Fig. 18）．また、同様の蛍光極大を持つ色素と比較して640 nmレーザーからの蛍光が減少しています．さらに，SBUV740はユニークなスペクトルプロファイルを持つため，フルスペクトルフローサイトメトリーパネルに最適です．

Fig. 17. SBUV740．A, 従来のスペクトルUltravioletレーザー（点線）による励起と蛍光ヒストグラム(影付き)．B:正規化色素シグネチャー．全波長での蛍光を示す全蛍光スペクトル．データは，SpectroFlo ソフトウェアを使用し，5L Cytek Aurora フローサイトメトリーシステムで収集した．

Fig. 18. 明るさの比較．ヒト末梢血をCD4SBUV740 (MCA1267SBUV740) またはCD4 BUV737で染色した．SBUV740は比較色素より2倍明るい．BUVはBrilliant Ultraviolet，SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstain index．

SBUV795 は，StarBright Dyes のすべての利点を備えた 355 nm の明るいレーザー励起色素で，従来のフローサイトメトリーおよびフルスペクトルフローサイトメトリーの両方での使用に適しています（Fig. 20）．

Fig. 19. SBUV795．A, 従来のスペクトル．紫外レーザー（点線）による励起と，蛍光ヒストグラム．B:正規化色素シグネチャー.全波長での蛍光を示す全蛍光スペクトル．データは，SpectroFlo ソフトウェアを使用し，5L Cytek Aurora フローサイトメトリーシステムで収集した．

Fig. 20. 明るさの比較. ヒト末梢血をCD4SBUV795 (MCA1267SBUV795) またはCD4 BUV805で染色した．SBUV795は競合色素よりも明るい（2倍以上）．BUVはBrilliant Ultraviolet，SBUVはStarBright UltraViolet，SIはstain index．

SBUV795は，最も近い競合色素（Fig. 20）の2倍の明るさで，スピルオーバープロファイルは類似している．固定が可能であり特別なバッファーも不要で，タンデム色素には見られないロット間の再現性があるため，SBUV795を既存のパネルに簡単に追加して，レーザーやフィルターの使用を拡大したり，より高分解能の色素に置き換えたりすることができます．他のStarBright蛍光色素とのマルチプレキシングを含め，ヒトおよびマウスサンプルと他の蛍光色素とのSBUV795染色の例をFigure 21に示す．

Fig. 21. SBUV795の性能．ヒト末梢血を様々なSBUV795標識抗体で染色し，様々なStarBright UltraViolet，StarBright Violet，またはAlexa標識抗体でカウンター染色した．染色はFcブロックを加えた1％BSA含有PBS中で行った．