StarBright Red蛍光色素

SBR670は，当社の新しいStarBright Red蛍光色素シリーズの第1弾です．これは，640 nmのレーザー励起可能な蛍光色素で，666 nmで蛍光を発し，狭い励起と蛍光スペクトルを持っています（Fig. 2）．

Fig. 2. SBR670. A， 従来型スペクトル．.赤色レーザー（点線）による励起で，影付きヒストグラムに蛍光が示されています．B， 正規化色素シグネチャー．すべての波長での蛍光を示す完全な蛍光スペクトル．データは，SpectroFloソフトウェアを使用し，5-L Cytek Auroraフローサイトメトリーシステムで収集されました．

SBR670 は，Alexa Fluor 647 (A647)およびAllophycocyanin (APC)(not shown)よりも明るいことが確認されています(Figure 3)．一般的な染色バッファーと併用可能であり，PFAまたはアルコール含有のバッファーで固定してもシグナルの損失が最小限に抑えられます．

Fig. 3. SBR670とAPC，A647の比較．A，ヒト末梢血をCD4 SBR670 (MCA1267SBR670) )(赤)またはCD4 A647 (MCA1267A647) )(青)で染色し，670/30フィルターを使用してZE5細胞アナライザーで解析した．すべての抗体は使用前に希釈して最適な濃度を決定した．B，APCとSBR670の全波長における正規化されたエミッションスペクトル．データは5-L Cytek AuroraフローサイトメトリーシステムとSpectroFloソフトウェアを使用して収集された．

さらに，StarBright Red 670蛍光色素は独自のスペクトルを有し，類似度スコアが0.94であり，異なるチャネルで最大蛍光を示すため，フルスペクトルフローサイトメトリーマルチカラーパネルにおいてAPCと容易に併用可能です（Figure 3)．
 

SBR715は，640 nmのレーザーで励起可能な非常に明るい色素で，712 nmで蛍光を発し，狭い励起と蛍光のスペクトルプロファイルが特長です．この色素は独自のスペクトルを有し，A700との類似度スコアは0.83です（Figure 4）．

Fig. 4. SBR715. A， 従来型スペクトル赤色レーザー（点線）による励起により，影付きヒストグラムで示した蛍光を示していますB， 正規化した蛍光色素シグネチャー． すべての波長での蛍光を示す完全な蛍光スペクトル．データは，SpectroFloソフトウェアを使用し，5-L Cytek Auroraフローサイトメトリーシステムで収集されました．.

561 nmレーザーによる励起が生じる可能性があるため，PE-Cy5.5やSBY720などの蛍光色素を使用する場合，スプレッディングが生じる可能性があります．ただし，パネル設計を適切に行うことでこの問題を軽減できます．

ZE5 セルアナライザーにおいて，SBR715はAlexa Fluor 700（A700）よりも10倍以上明るいことが確認されています（Figure 5）．一般的な染色バッファーと併用可能で，PFAまたはアルコールベースのバッファーで固定しても信号の損失が最小限に抑えられます．

SBR775は，他の色素と比べて独自の励起・蛍光プロファイルを有する，640 nmの励起波長で励起され，778 nmで蛍光を発する明るい色素です．

Fig. 6. SBR775. A， 従来型スペクトル.  赤色レーザー（点線）による励起で，影付きヒストグラムに示す蛍光を発する B， 蛍光色素の正規化シグネチャー．すべての波長での蛍光を示すフルエミッションスペクトル．データは，SpectroFloソフトウェアを使用し，5-L Cytek Auroraフローサイトメトリーシステムで収集されました．

355 nm および405 nmのレーザーから得られる追加のシグナルが，APC-Cy7との類似度スコア0.88という独自性を生み出しています（Figure 6）．SBR775はAPC-Cy7と同等の明るさを有し，さらにPFAおよびアルコール系固定液で安定して固定可能であり，信号の損失がないという利点があります．これはAPC-Cy7では問題となる場合があります（Figure 7）．

Fig. 7. 固定後の明るさ比較と安定性．A, ヒト末梢血をCD4 SBR775 (MCA1267SBR775) （赤）またはCD4 APC-Cy7（青）で染色し，775/50フィルターを使用してZE5 Cell Analyzerで解析した．すべての抗体は使用前に希釈して最適な濃度を決定した．B， PFAまたはアルコール系固定液で固定したサンプルにおいて，性能の低下は観察されなかった．すべてのサンプルはZE5 Cell Analyzerで収集された．EtOH， エタノール； PFA， パラホルムアルデヒド．

さらに，SBR775は，シアニン含有色素で報告されているような非特異的な方法で単球に結合しません（data not shown）．

Fig. 8. SBR815. A， 従来型スペクトル赤色レーザー（点線）による励起で，影付きヒストグラムに示す蛍光を示していますB， 正規化した色素シグネチャーすべての波長での蛍光を示す完全な蛍光スペクトル．データは，SpectroFloソフトウェアを使用した5-L Cytek Auroraフローサイトメトリーシステムで収集されました．

SBR815 は，当社の640 nmで励起可能なStarBright色素の4番目の製品です．640 nmのレーザーで励起され，811 nmで蛍光を発する明るい色素で，他の色素と比べて独自の励起・蛍光プロファイルを有しています（Figure 8）．

SBR815は，ZE5 Cell Analyzer上でAPC-Fire 810およびAPC-eFluor 780よりも明るく，さらにPFAおよびアルコールベースの固定液で安定して固定でき，信号の損失がないという利点があります（data not shown）．

他のレーザーからの追加信号が独自性を生み出し，APC-Fire 810との類似性スコアは0.81，APC-eFluor 780との類似性スコアは0.79です．SBR815はAPC-Fire 810とパネルで併用可能ですが，顕著な広がりがあるため，相互排他的なマーカーが推奨されます（Figure 10）．

Fig. 10. SBR815のフルスペクトルフローサイトメトリー． A, SBR815とAPC-Fire 810のフルエミッションスペクトルを示し，すべての波長での蛍光を明らかにしています． B, ヒト末梢血細胞をHLA-DRにAPC-Fire 810，CD8にSBR815 (MCA1226SBR815). で染色しました．データはCytek AuroraフローサイトメトリーシステムとSpectroFloソフトウェアを使用して収集されました．

StarBright Red 蛍光色素は，他の StarBright 色素および伝統的な蛍光色素と組み合わせて，従来の蛍光パネルおよびスペクトルパネルにおいて効果的に使用可能です．これらの色素は，当社が学会で発表した ポスター にも掲載されています．

Fig. 11. 8色フルスペクトルフローサイトメトリーパネル（7種類の640 nm励起可能な色素を含む）．A, ，ヒト末梢血をCD14A647 (MCA1568A647), CD8SBR670 (MCA1226SBR670), CD16A700 (MCA2537A700), CD19SBR715 (MCA1940SBR715), CD3SBR775 (MCA463SBR775), CD40APC-Cy7, CD4SBR815 (MCA1267SBR815), および405 nm励起可能な生存染色剤VivaFix408/512 (1351113). で染色されました．データはCytek Auroraスペクトルアナライザーで生成されました．B，8色パネルの類似性マトリックスと複雑度スコア．

さらに，当社は複数のStarBright Red色素を他の640 nmで励起可能な色素と組み合わせることに成功し，フルスペクトルフローサイトメトリーにおいて7つの640 nm励起可能な色素を含む独立した8色パネルを作成しました．これにより，パネル構築の可能性が拡大されました（Figure 11)．