リン酸化特異的PrecisionAb抗体

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リン酸化イベントを検出する高特異性抗体

Generation of Recombinant Ani-EGF R and Anti-EGF R pTyr1045

組換え抗EGF Rと抗EGF R pTyr1045抗体のポスターを見る

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Bio‑Rad の新しいリン酸化特異的バリデーション済み PrecisionAb 抗体は，処理細胞と未処理細胞のライセートにおけるリン酸化レベルの比較に加え，ウェスタンブロット膜上でのタンパク質脱リン酸化によってバリデーションされています（Figure 1）．

当社が実施しているリン酸化レベルの定量により，細胞処理の影響を迅速に把握でき，抗体の特異性を容易に評価することが可能です（Figure 2）．
 

Fig. 1. Western blot analysis of whole cell lysates probed with A, Mouse Anti-EGF Receptor Antibody (VMA00061) or B, Mouse Anti-EGF Receptor (pTyr1173) Antibody (VMA00752).

Fig. 1. 全細胞ライセートを用いたウエスタンブロット解析．A：マウス抗EGF受容体抗体 (VMA00061) ，B：マウス抗EGF受容体（pTyr1173）抗体（VMA00752）を用いた．続いて，HRP標識ヤギ抗マウスIgG (1/10,000, STAR207P) で検出を行った．メンブレンは示された通りラムダプロテインホスファターゼ存在下（+）および非存在下（-）で処理され，ChemiDoc MPイメージングシステムで可視化された．
Fig. 2. Total Protein Normalization.


Fig. 2. 総タンパク質による正規化． PVD 処理および未処理の細胞ライセートにおける EGF 受容体（pTyr1173）の正規化シグナル強度（ラムダプロテインホスファターゼ処理（＋）または未処理（−））．
ラムダプロテインホスファターゼはセリン，スレオニン，チロシン残基を脱リン酸化する．正規化シグナル強度は，各リン酸化タンパク質の TPN 正規化シグナル強度を，対応する総タンパク質の TPN 正規化シグナル強度で割って算出した． TPN Total Protein Normalization について詳しくはこちら．

Western Blot Detection of Phosphorylation Eventsリン酸化イベントを検出するウェスタンブロット
 

Detection of Phosphorylated Proteins by Western Blottingウェスタンブロットによるリン酸化タンパク質の検出
 

リン酸化ウェスタンブロットのコントロールとして，どの総タンパク質抗体を選ぶべきかお悩みですか？

リン酸化特異的抗体と総タンパク質抗体の異なる結合特性を示すため，リン酸化特異的 PrecisionAb 抗体と総タンパク質 PrecisionAb 抗体を比較しました． これにより，各種処理の影響を評価でき，適切なコントロール選択の目安となります．総タンパク質抗体とリン酸化特異的抗体は，それぞれ個別にご購入いただけます．

疾患研究におけるタンパク質のリン酸化

リン酸化は複数の生物学的プロセスの制御に関与しており，適切なリン酸化は細胞の恒常性維持に不可欠です． キナーゼは特定のタンパク質へのリン酸基の転移を触媒する酵素であり，一方ホスファターゼはリン酸基を除去します． 特定のキナーゼ（Table 1）やホスファターゼの変異は，さまざまな疾患の原因となります． また，リン酸化によって定義される変異や活性化状態は，臨床経過に大きな影響を及ぼす可能性があります（Magkou et al. 2008）． シクロスポリンやラパマイシンは，タンパク質ホスファターゼやキナーゼを阻害することで作用する最初の薬剤でした（Cohen 2001）． タンパク質リン酸化とその機能に関する知見が深まるにつれ，タンパク質キナーゼやホスファターゼを標的とする薬剤の開発がさらに可能になります．

Table 1. 特定のタンパク質キナーゼの変異によって引き起こされる疾患の例（Cohen 2001）

Disease

Kinase

Autosomal recessive SCID

Zap70 kinase

X-Linked SCID

Jak3 kinase

Non-Hodgkins lymphoma

Alk1 kinase

Peutz-Jeghers syndrome

Lkb1 kinase

Li-Fraumeni syndrome

Chk2 kinase

がん治療薬としてキナーゼを標的とする薬剤の開発が注目されており，その結果として低分子キナーゼ阻害剤が開発されてきました．さらに，上皮成長因子（EGF）と EGF 受容体（EGFR）の相互作用を阻害する治療用モノクローナル抗体セツキシマブ (Cetuximab), は，大腸がんや頭頸部がんの治療に用いられています．効果的な治療法の開発における課題の一つは，複雑なシグナル伝達経路を理解し，そこに関与するタンパク質を研究するための強力なツールを提供することです．例えば，EGF R,  経路には 211 の生化学反応と 322 のシグナル伝達分子が関与しています（Oda et al. 2005）．

リン酸化はタンパク質のフォールディングや凝集にも影響を及ぼし，神経変性疾患において重要な役割を果たしています． 例えば，脳脊髄液（CSF）中のリン酸化タウは，アルツハイマー病の主要なバイオマーカーの一つとされています（Suarez‑Calvet et al. 2020）．

対象タンパク質のリン酸化部位を特異的に認識する抗体を使用することが，タンパク質リン酸化を解析する最も簡便な方法です．以下に，堅牢なデータ取得を可能にする，高度にバリデーション済みのリン酸化特異的 PrecisionAb 抗体の一部をご紹介します． ※製品は研究用であり，診断目的には御利用いただけません．

Phospho-Specific PrecisionAb Antibodies Range

    DescriptionSpecificityTargetFormatHostIsotypeClone Applications Citations Product Type Code Validation Types

    参考文献

    • Cohen P (2001). The role of protein phosphorylation in human health and disease. Eur J Biochem 268, 5001-5010.
    • Magkou C et al. (2008). Expression of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and the phosphorylated EGFR in invasive breast carcinomas. Breast Cancer Res 10, R49.
    • Oda K et al. (2005). A comprehensive pathway map of epidermal growth factor receptor signaling. Mol Syst Biol 1, 2005.0010.
    • Suarez-Calvert M (2020). Novel tau biomarkers phosphorylated at T181, T217 or T231 rise in the initial stages of the preclinical Alzheimer’s continuum when only subtle changes in Aβ pathology are detected. EMBO Mol Med. 12, e12921.
    Cell Signaling range