多重蛍光ウェスタンブロッティング

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蛍光免疫ブロットイメージング

単一のサンプルから得られるデータ量を最大化したいというニーズの高まりに伴い，蛍光を利用したマルチプレックスアッセイが開発されました．
マルチプレックス蛍光ウエスタンブロッティングでは，1つのサンプルに含まれる複数のタンパク質を同じブロット上で同時に検出でき，1回の実験で可能な限り多くの情報を得ることができます．

蛍光ウエスタンブロッティングを用いたマルチプレックス解析の利点

複数のサンプルを同じ実験条件下で解析できる
複数のタンパク質やパラメーターを同時に検出できるため，より文脈に沿った結果が得られる
酵素反応によるばらつきがなく，蛍光色素による検出により一貫性の高い結果が得られる
貴重なサンプルの使用量を最小限にしつつ，得られる情報量を最大化できる
コストと作業時間を削減できる

Bio‑Rad は，新世代のマルチプレックスウエスタンブロッティング用試薬および装置を提供しています．これには以下が含まれます．

マルチプレックス蛍光ウエスタンブロッティングの詳細については，入門ガイドをご覧ください．

StarBright Blue二次抗体

StarBright 蛍光色素は，非常に明るく安定した半導体ナノ粒子で標識されており，蛍光の発光が狭いスペクトル帯域に限定されているため，ウエスタンブロッティングにおける多重蛍光イメージングに最適です．
青色光（440–470 nm）で励起され，2 種類のカラーが用意されています．StarBright Blue 520：スペクトルの緑色領域で発光（最大発光波長：520 nm) StarBright Blue 700：スペクトルの遠赤外／近赤外領域で発光（最大発光波長：700 nm）

Fig. 1. Composite blot image for quadruples western blotting.

Fig. 1. 四重ウェスタンブロッティングの合成ブロット画像

Color	Target Protein	Primary Antibody	Secondary Antibody
Red	USP2	Rabbit Anti-Human USP2	Goat Anti-Rabbit IgG StarBright Blue 700
Yellow	Tubulin	Anti-Tubulin hFAB-Rhodamine	Not required
Green	AKR1C2	Mouse Anti-Human AKR1C2	Goat Anti-Mouse IgG StarBright Blue 520
Blue	TP1	Goat Anti-Human TP1 (biotinylated)	DyLight 800 Streptavidin

Figure 1 は，ChemiDoc MP イメージングシステムを用いて一般的なハウスキーピングタンパク質を検出するために，StarBright Blue 520 および StarBright Blue 700 の二次抗体，DyLight 800，さらに rhodamine 標識組換えヒト hFAB 抗体を組み合わせて，4 種類のタンパク質を可視化した合成ブロット画像を示しています．

このマルチプレックスウエスタンブロットには，特異性・感度・一貫性について厳しく評価され，優れた性能と再現性が確認された PrecisionAb 抗体が使用されています．

PrecisionAb 抗体の検証プロセスやユーザーの使用体験，そして提供されている全ラインナップについての詳細はこちらをご覧ください．

StarBright Blue 二次抗体が従来の蛍光色素と比べて優れている点：

高感度な蛍光検出 — 従来型蛍光色素と比較して検出限界が 2〜4 倍低い
短い露光時間 — 露光時間が 50〜100 倍短縮（数分が数秒に）
スムーズなマルチプレックス化 — Stain‑Free ゲルおよびブロットイメージング検出，hFAB Rhodamine 抗体，さらに従来型蛍光色素で標識された抗体との高い互換性を備えています．

使用方法，ヒント，トラブルシューティング，および詳細情報については，StarBright Blue 抗体取扱説明書ならびに「蛍光ウエスタンブロッティング総合ガイド」取扱説明書をご参照ください．

StarBright Blue 700 二次抗体ラインアップ

# Catalog	Description
12004158	Goat Anti-Mouse IgG StarBright Blue 700, 400 µl
12004159	Goat Anti-Mouse IgG StarBright Blue 700, 80 µl
12004161	Goat Anti-Rabbit IgG StarBright Blue 700, 400 µl
12004162	Goat Anti-Rabbit IgG StarBright Blue 700, 80 µl

StarBright Blue 520 二次抗体ラインアップ

# Catalog	Description
12005866	Goat Anti-Mouse IgG StarBright Blue 520, 400 µl
12005867	Goat Anti-Mouse IgG StarBright Blue 520, 80 µl
12005869	Goat Anti-Rabbit IgG StarBright Blue 520 400 µl
12005870	Goat Anti-Rabbit IgG StarBright Blue 520, 80 µl

TrailBlazer™ タグおよびTrailBlazer StarBright蛍光色素ラベルキット

選択した抗体は，TrailBlazer タグと StarBright蛍光色素標識キットを使って，簡単に StarBright 蛍光色素で標識できます．
これらの TrailBlazer キットは，SpyTag，SpyCatcher，そして StarBright 色素といった革新的な技術を組み合わせることで，高品質な標識抗体を手軽に作製できるように設計されています．

蛍光ウエスタンブロットでは，TrailBlazer キットで StarBright 色素を標識した抗体を使用することで，短時間の露光で，明るく高感度な蛍光シグナルを得ることができます．

hFAB Rhodamineハウスキーピングタンパク質蛍光一次抗体

hFAB 抗体は，主要なハウスキーピングタンパク質（HKP）である β‑チューブリン，β‑アクチン，GAPDH を認識する一次抗体で，緑色励起rhodamineで直接標識されています．
これらの抗体はヒト由来の免疫原を基に作製されていますが，ハウスキーピングタンパク質は進化的に高く保存されているため，マウス抗体やウサギ抗体と組み合わせたマルチプレックス実験にも問題なく使用できます．

これらの Fab フラグメントには，次のような特長があります

製品の一貫性とデータの再現性を確保
マルチプレックスで使用できる抗体種の選択肢を広げる：事前に標識されているため二次抗体を必要とせず，また従来の二次検出試薬に認識されないため，どの二次抗体とも干渉することなく併用できます．
二次抗体なしでローディング量の正規化を容易に実現：hFAB Rhodamine 抗体は，細胞ライセート 10〜50 µg の一般的なローディング範囲で直線的なレスポンスを示し，
低量・高量の違いを明確に判別できます
マルチプレックス解析に最適化（蛍光特性：励起 530 nm／発光 580 nm）
- StarBright 色素を用いたウエスタンブロッティングではクロストークがなく，3 色のマルチプレックス解析が可能（緑色蛍光は StarBright 700 の青色蛍光と StarBright 520 の青緑蛍光の中間に位置）
- DyLight 800 および Alexa 647 標識抗体との併用で，5 色のマルチプレックス解析が可能（Figure2））

Fig. 2. Western blot of HeLa cell lysate probed with five different antibodies.

Figure 2. HeLa 細胞ライセートを5種類の抗体でプローブしたウエスタンブロット

使用方法，ヒント，トラブルシューティング，さらに詳しい情報については， hFAB Rhodamine 抗体取扱説明書および the Fluorescent Western Blotting Antibodies - Experience Unmatched Sensitivity」カタログをご参照ください．

hFAB Rhodamine抗体ラインアップ

# Catalog	Description
12004163	Anti-Actin hFAB Rhodamine Antibody, 200 µl
12004164	Anti-Actin hFAB Rhodamine Antibody, 40 µl
12004165	Anti-Tubulin hFAB Rhodamine Antibody, 200 µl
12004166	Anti-Tubulin hFAB Rhodamine Antibody, 40 µl
12004167	Anti-GAPDH hFAB Rhodamine Antibody, 200 µl
12004168	Anti-GAPDH hFAB Rhodamine Antibody, 40 µl

ChemiDoc MPイメージングシステムおよびImage Lab Touchソフトウェアによるイメージング

ChemiDoc イメージャーは，可視光（RGB），遠赤外／近赤外（FR/NIR）蛍光，そして化学発光の検出に対応しています．Stain‑Free イメージングを利用することで，ゲル染色を行わずに，タンパク質をすぐに可視化し，確認することができます．Image Lab ソフトウェアは，ゲルや画像の取得から解析までを行うためのソフトウェアパッケージです．

Stain Freeテクノロジー

Stain‑Free テクノロジーを使うと，SDS‑PAGE ゲルを染色や脱色することなく，タンパク質をそのまま可視化できます．
ゲル内に含まれるトリハロ化合物は，UV 光で活性化されるとタンパク質中のトリプトファン残基と共有結合し，これによってタンパク質が蛍光シグナルとして見えるようになります．
この方法により，電気泳動からブロッティングまでの一連の工程の中で，ゲルや PVDF 膜上のタンパク質を何度でも可視化でき，ウエスタンブロッティングのワークフローにおける検証を効率的に行うことができます．

Stain‑Free テクノロジーを利用すると，ゲルにロードしたサンプルの総タンパク質量を基準にウエスタンブロットのバンド強度を正規化でき，その後の相対定量解析に活用することができます．
トリハロ化合物を含む Stain‑Free プレキャストゲルは，ミニサイズとミディサイズの両タイプを用意しています．また，TidyBlot ウエスタンブロット検出試薬を使用した IP 実験における，Stain‑Free テクノロジーのワークフロー例もあわせてご覧いただけます．

ChemiDoc MP イメージングシステムが誇るクラス最高レベルの性能：

低い蛍光バックグラウンドによる高感度検出
X 線フィルムに匹敵する化学発光の高感度
直感的に使える操作性の高いソフトウェア
マルチプレックス蛍光検出に対応

本ウエスタンブロットイメージングシステムとソフトウェアについて，製品仕様，ユーザーガイド，各種リソースなどの詳細をご覧いただけます．

※製品は研究用であり，診断用途にはご利用いただけません．

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