Bio-Radは，ヒト IgG Fcに特異的な2つの抗体クローンを提供しており，非ヒト霊長類のサンプル中の治療用ヒト抗体またはヒト化抗体の検出に使用できます．

Clone AbD27686 (HCA285) は，ヒト IgG1 Fc に特異的なリコンビナント一価 Fab 抗体で，親和性は 76 nM です．ヒト IgG1 と比較して，カニクイザル由来 IgG に対する親和性が約 90 分の1程度低いことが確認されています．また，アカゲザル由来 IgG に対する結合能も著しく低下しています．ヒトの他の免疫グロブリン（Ig）アイソタイプやマウスIgG2aは認識しません（Figure 1）．

この抗体はBio-Radによって，HuCAL®抗体ライブラリとCysDisplay®技術を用いて作製されました．研究用として販売されており，実験動物から得られたサンプルからの治療用抗体の検出に使用されます．Bio-Radにより抗原捕捉薬物動態（PK）アッセイフォーマットで試験された結果，この抗体は，10%カニクイザル血清中でマウス抗ヒト IgG（CH2ドメイン）抗体やクローンR10Z8E9と類似した性能を示しました（Figure 2）．この抗体は，クローンR10Z8E9とは異なるHuman IgG1 Fc上のエピトープを認識します（Figure 3）．

クローン R10Z8E9 (MCA5748G)  は，ヒト IgG CH2 ドメインに特異的なマウスモノクローナル抗体です．ELISA により，この抗体は，非ヒト霊長類であるヒヒ，マーモセット，アカゲザル，カニクイザルの IgG を認識しないことが示されています．また，マウスやラットの免疫グロブリンも認識しません．

重要な注意事項：クローン R10Z8E9 は，EP 1 853 921（F. Hoffmann-La Roche AG，Basel，Switzerland）および/または US 7,955,806（Hoffmann-La Roche， Inc.，Nutley，NJ）の特許権者から事前に同意を得ない限り，実験動物から得られたサンプル中の治療用抗体の検出には使用できません．

Human IgG Fcに特異的な抗体

Specificity

Clone

Catalog Number

Format

Species Cross-reactivity

Terms of Use

Human IgG1 Fc

AbD27686

HCA285

 

Fab-FH1

Cynomolgus macaque – low cross reactivity2
Rhesus macaque – low cross reactivity
Baboon – not tested
Marmoset – not tested

Mouse IgG2a - no

Permitted for use for the detection of therapeutic antibodies from samples obtained from experimental animals

HCA285P

Fab-FH1

HRP labeled

Human IgG CH2 domain

R10Z8E9

MCA5748G

Mouse IgG1

Cynomolgus macaque - no
Rhesus macaque - no

Baboon - no
Marmoset - no

Mouse - no

Rat - no

Prior consent required for the detection of therapeutic antibodies from samples obtained from experimental animals3

1 F=DYKDDDDK-tag H=His-6-tag
2 89-fold lower affinity to cynomolgus macaque IgG than to human IgG1
3 Consent required by the owner of EP 1 853 921 (F. Hoffmann-La Roche AG, Basel, Switzerland) and /or US 7,955,806 (HOFFMANN-LA ROCHE, INC., Nutley, NJ)

抗体クローン AbD27686 （HCA285）の特異性

Fig. 1. Demonstration of specificity to human IgG1 and strongly reduced binding to rhesus and cynomolgus macaque IgG.

Fig. 1. ヒト IgG1に対する特異性と，アカゲザルおよびカニクイザルのIgGに対する結合の著しい減少．

マイクロタイタープレートに，5 µg/mlの濃度でさまざまな抗体を一晩コーティングした．その後，PBST + 5% BSAで洗浄し，ブロッキングを行った．次に， Human Anti-Human IgG1 Fc 抗体 (クローン AbD27686，HCA285) の濃度を段階的に増加させて添加した．検出は，HISPEC Assay Diluent（BUF049A）中の Mouse Anti-Penta Histidine Tag:HRP (MCA5995P) in HISPEC Assay Diluent (BUF049A) とQuantaBlu蛍光過酸化物酵素基質を使用して行いました．

薬物動態（PK）アッセイ 抗原捕捉法

Fig. 2. PK ELISA antigen capture format demonstrating detection of a humanized therapeutic antibody with anti-human IgG Fc-specific antibodies in cynomolgus serum.

Fig. 2. PK ELISA抗原捕捉法によるヒト化治療用抗体の検出．抗ヒト IgG Fc特異的抗体を用いて，カニクイザル血清中のヒト化治療用抗体が検出されたことを示唆している．

マイクロタイタープレートに，5 µg/mlの濃度でVEGFを一晩コーティングした．PBST + 5% BSAで洗浄およびブロッキングを行った後，濃度を段階的に増加させたbevacizumab（hIgG1 kappa）を含む10%のカニクイザル血清を添加した．検出には, HRP標識 Anti-Human IgG1 Fc 抗体 (クローンAbD27686，HCA285P), HRP標識 Mouse Anti-Human IgG (CH2ドメイン) 抗体 (クローンR10Z8E9，MCA5748G) ，またはヒトFc特異的でない抗体のコントロールとして， HRP標識 Mouse Anti-Human Fc CH2ドメイン抗体 (クローンMK 1 A6，MCA647P) を，HISPECアッセイ希釈液 (BUF049A) およびQuantaBlu蛍光過酸化物酵素基質中で2 µg/mlの濃度で用いました．データは3回の測定の平均値として示されています．

プロトコル：HCA285Pを用いた抗原捕捉ELISA

阻害型ELISAにより示されるHuman IgGの異なるエピトープに結合する抗体の存在

Fig.3. Antibody clones AbD27686 and R10Z8E9 bind to different epitopes on human IgG.

Fig. 3. 抗体クローン AbD27686 と R10Z8E9 はヒト IgG の異なるエピトープに結合する

マイクロタイタープレートに，Mouse Anti-Human IgG（CH2ドメイン）抗体クローンR10Z8E9を1 µg/mlの濃度で一晩コーティングした．その後，PBST + 5% BSAで洗浄およびブロッキングを行った．リコンビナント Human IgG1 Kappa (HCA192) (0.5 µg/ml) と，濃度を段階的に増加させた Human Anti-Human IgG1 Fc抗体 (クローンAbD27686，HCA285) または Mouse Anti-Human IgG（CH2ドメイン）抗体 (クローンR10Z8E9，MCA5748G) を混合したプレインキュベーション済みの混合液を添加した．R10Z8E9でコーティングされたプレートに結合可能な遊離のHuman IgG1 Kappa抗体は， HISPEC Assay Diluent (BUF049A) 中に2 µg/mlの濃度で調製したHRP標識R10Z8E9抗体を用いて検出された．データは3回の測定の平均値として示されている．

クローンAbD27686（HCA285およびHCA285P）の使用許諾：in vitro研究目的および，前臨床および臨床薬物開発を支援するためのin vitro試験サービス提供を目的とした商業的アプリケーション．いかなる形態での再販売またはその他の商業的アプリケーションにも，Bio-Radとの書面による合意が必要です．

※記載の製品は研究用であり，診断目的にはご利用いただけません．