TrailBlazer タグと TrailBlazer StarBright色素ラベルキット

TrailBlazerタグとラベルキットは，シンプルな2キットプロセスにより，精製抗体を幅広いStarBright色素でラベルすることを可能です（Figure 1）．

“分子接着剤”とも呼ばれる革新的なSpyTagおよびSpyCatcherテクノロジーは，StarBright色素を抗体に「接着」させるために使用されます（Keeble et al. 2017）．まず，タグキットを使用してSpyTagを抗体に取り付けます（Figure 1.A）．この抗体（または既にSpyTagを持つ組み換え抗体）を，ラベルキットを用いてStarBright蛍光色素でラベルしたSpyCatcherと混合します（Figure 1.B）．

SpyTagとSpyCatcherの間で自発反応が起こり，不可逆的な共有結合イソペプチド結合が形成されます．これが，TrailBlazerコンジュゲーションキットから安定性の高いラベル抗体が得られる理由です．SpyTagとSpyCatcherの技術は TrailBlazer抗体作成のためにカスタムHuCAL®リコンビナント抗体作製サービスにおいても使われています。

Fig 1. TrailBlazerタグとStarBrightラベルキットの概要．A. SpyTagの精製抗体への結合．B. SpyTagラベル抗体をStarBright色素Catcherへコンジュゲーション．

TrailBlazerキットは，最小限の作業時間で簡単に使用できる（Table 1）．作業時間が短いため，他の作業も並行して行うことができます．

• TrailBlazer タグキット使用説明書
• TrailBlazer StarBrightラベルキット使用説明書

抗体の調製や修飾，SpyTagのアタッチメント，StarBright色素のラベリングなど，コンジュゲーションプロセスの各ステップを記録する便利なプロトコールワークシートをご活用ください．

このテンプレートをダウンロード して，実施したことを記録してください．

Table 1. タグとラベルキットの標準的な所要時間 

*オーバーナイトインキュベーションを使用する場合，インキュベーション時間が長くなります．

TrailBlazerキットは，ワークフローに簡単に組み込むことができるように設計されているため，様々な抗体アイソタイプ（Table 2）やバッファー（Table 3）と互換性があり便利です．

Table 2. アイソタイプの適合性

Table 3. バッファーの互換性

TrailBlazerキットでラベルされた StarBright 抗体は，市販のラベル抗体に匹敵するだけでなく，StarBright 色素 の利点も備えています．例えば，StarBright Violet 440に結合した抗体は，Readilink Conjugation Kitを使用して結合した同等の蛍光色素の抗体よりもかなり明るい（Figure 2）．このため，フローサイトメトリーで抗原密度の低いマーカーを検出したり，ウェスタンブロッティングで存在量の少ないタンパク質を検出するのに理想的です．

Figure 2. TrailBlazer および Readilink Conjugation Kits を用いてコンジュゲートした抗体の比較． A. マウス抗ヒト CD4 ( MCA1267 ) または B. マウス抗ヒト CD8 ( MCA1226 ) は，TrailBlazerタグキット(12020038) および StarBright Violet 440ラベルキット (12020042)(赤)，または Readilink 405/454 Antibody Labeling Kit ( 135011 )(青)を用いてタグおよびラベルした．ヒト PBMC は，10% ヒト血清存在下で染色した．データは ZE5 Cell Analyzer で取得．